HPLC緩沖液選擇考量因素
化學(xué)純度:HPLC實(shí)驗(yàn)所用流動相添加劑(緩沖液、鹽、酸和堿)及有機(jī)溶劑質(zhì)量必須適合檢測器靈敏度和洗脫方案。為實(shí)現(xiàn)較好的色譜分離效果,建議使用高質(zhì)量溶劑和試劑。
化學(xué)相容性:必須根據(jù)色譜柱外殼材料和固定相性質(zhì)選擇緩沖液組成及流動相pH值,避免損壞色譜柱硬件和柱床。
緩沖液溶解性:緩沖液需要完全溶于水且不會沉淀。將緩沖液與有機(jī)溶劑混合時,必須謹(jǐn)慎選擇緩沖液濃度,避免因濃度過高而形成沉淀。否則可能造成泵運(yùn)行問題,引起HPLC色譜柱堵塞。
緩沖強(qiáng)度:與固定相相互作用弱的洗脫液今可從色譜柱上洗脫弱吸附分析物,而強(qiáng)相互作用洗脫液則可洗脫強(qiáng)吸附樣品分子。不同溶劑的洗脫或溶劑強(qiáng)度主要取決于所用固定相的類型。除洗脫強(qiáng)度之外,緩沖液粘度和紫外線吸收率也對HPLC分析適用性存在重要影響。
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